加入收藏
百奥莱博公司客服电话百奥莱博QQ百奥莱博QQ百奥莱博QQ
百奥莱博公司微信服务号

产品目录

高纯酵母质粒大量提取试剂盒(100~180mL)图片
产品货号:
ALH093
中文名称:
高纯酵母质粒大量提取试剂盒(100~180mL)
英文名称:
Yeast Plasmid Maxi Kit(100-180mL)
产品规格:
10次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞并结合破壁酶特异消化酵母细胞壁,能快速从酵母培养液中分离出高纯度质粒DNA。酵母收集后,加入破壁酶去除细胞壁后,然后碱裂法裂解细胞,离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低PH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,最后低盐、高PH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。




  • 离心吸附柱内硅基质膜全部采用特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
  • 不需要使用有毒的苯酚,氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。快速,方便。
  • 获得的质粒产量高、纯度好,可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。



组分规格保存
RNase A(10mg/mL)750μL4℃
破壁酶1g
溶液YP170mL
溶液YP270mL室温
溶液YP3100mL
去蛋白液PE64mL
漂洗液WB50mL
洗脱缓冲液EB20mL
吸附柱DC及收集管(50mL)10套

保存:2~8℃,有效期1年。


  • RNase A保存在即用型甘油缓冲液中,常温运输,收到后,不超过25℃室温至少保存6个月,4℃保存12个月,长期保存放-20℃。
  • 第一次使用时,可将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液YP1后(终浓度100μg/mL)置于4℃可保存3个月左右。如果溶液YP1中RNase A时间较久失活了,提取的质粒可能有微量RNA残留,在溶液YP1中补加RNase A即可。
  • 环境温度低时溶液YP2中SDS可能会析出,出现浑浊或者沉淀,可在37℃水浴加热几分钟即可恢复澄清,重新混匀,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。



用户需要自备Sorbitol buffer(1M山梨醇,0.1M Na2EDTA,14mM β-巯基乙醇)。
  • 配制方法:在600mL去离子水里面溶解182.2g山梨醇,加入200mL Na2EDTA(0.5M,pH8.0),不需要调节PH值,定容到1L,4℃保存。临用前加0.1% β-巯基乙醇(商品化的β-巯基乙醇摩尔浓度一般为14M)。



  • 所有离心步骤如未加另外说明均在室温完成,使用转速可以达到8000×g(~9000rpm),带50mL转头的台式离心机。
  • 通常酵母质粒拷贝数都很低,高拷贝质粒最大得率一般为每5mL培养物提取1μg左右的质粒。用于下游试验时通常建议使用量为:1~5μL用做PCR模板;5~10μL用于转化大肠杆菌,选择高效率的感受态细胞。
  • 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260值为1相当于大约50μg/mL DNA。电泳可能为单一条带,也可能为2条或者多条DNA条带,这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成,与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本试剂盒正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。
  • 菌体浓度检测一般OD 600值为1的时候,酿酒酵母细胞是1~2×107 cells/ml,由于菌种和分光度计不同即使同样细胞数量OD值变化也很大,以上仅供参考。
  • 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱,但应该确保批pH大于7.5,pH过低影响洗脱效率。用水洗脱质粒应该保存在-20℃。质粒DNA如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。



  • 第一次使用前请先在漂洗液WB瓶中加入200mL无水乙醇、去蛋白液PE瓶中加入40mL无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入。
  • 将RNase A全部加入溶液YP1中,混匀,每次使用后置于2~8℃保存。
  • 吸取使用量的Sorbitol buffer加入0.1%β-巯基乙醇,回复到室温备用。



  • 取120~200mL酵母培养的菌液加入50mL离心管,8000×g(~9000rpm),离心1min,尽可能的倒干上清,收集菌体。
    • 如使用50mL离心管,可以离心弃上清后,在同一个50mL管内加入更多的菌液,重复步骤1,直到收集到足够的菌体。
  • 加入10mL Sorbitol buffer,轻柔吹打充分重悬细胞;加入0.1g破壁酶(破壁酶临用前用2mL Sorbitol buffer溶解),充分颠倒混匀,37℃温育1~2小时消化细胞壁,中间可颠倒数次帮助消化。
    • 如果破壁效果不好导致质粒产量过低,可以加大破壁酶用量来提高酶工作浓度,还可以延长消化时间或者提高温度到45℃来提高效果,不适合破壁消化的酵母可选用Lyticase或者Zymolase或者其它方法如加玻璃珠涡旋振荡,反复冻融等。
  • 8000×g离心2min,彻底吸除上清,加7mL溶液YP1重悬菌体沉淀,移液器吹打或者涡旋振荡至彻底悬浮。
    • 如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。
  • 加7mL的溶液YP2,温和地上下翻转6~8次使菌体充分裂解,室温放置4~5min。
    • 温和地混合,不要剧烈震荡,以免基因组DNA剪切断裂!所用时间不应超过5min!以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠。如果很浑浊,可能由于菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体量。
  • 加10mL溶液YP3,立即温和地上下翻转6~8次,充分混匀此时会出现白色絮状沉淀。8000×g离心10min,小心吸取上清至新管,避免吸取到漂浮的白色沉淀。
    • 加入溶液YP3后应该立即混匀,以免产生SDS的局部沉淀。
    • 如有漂浮白色沉淀,可用吸头撇开浮沫伸入液面下吸取,偶然吸到少量漂浮的白色沉淀也不影响实验结果,后续过滤漂洗过程中都会去除。
  • 将上一步得到的上清中加入吸附柱DC中,8000×g离心1min,弃滤液。
    • 个别情况下离心机转子倾角较大,建议每次加入吸附柱的溶液体积为9mL(不超过,以防产生漏液现象)。直到所有混合溶液通过此吸附柱。
  • 加入10mL去蛋白液PE(请先检查是否已加入无水乙醇!),8000×g离心1min,弃滤液。
  • 加入10mL漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),8000×g离心1min,弃滤液。再加入10mL漂洗液WB,重复漂洗一次,弃滤液。
  • 将空吸附柱放回收集管中,8000×g离心3min以干燥基质膜上残留乙醇。
    • 该步骤为彻底去除吸附柱中残留乙醇,残留乙醇抑制下游反应并降低洗脱效率,降低质粒产量。
  • 将吸附柱置于新的50mL离心管中,室温晾干2~3min,在吸附膜的中间部位加1mL洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在65~75℃水浴中预热可提高产量),室温放置2min,8000×g离心1min,弃吸附柱。
    • 推荐:为了增加质粒的回收效率,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,室温放置1min,8000×g离心1min。洗脱两遍可提高浓度约10%。
    • 洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要质粒浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是需注意体积过小降低质粒洗脱效率,减少质粒产量(最小不应少于0.6mL)。

相关搜索:高纯酵母质粒大量提取试剂盒(100~180mL)酵母高纯度质粒大量快速提取酵母质粒大量提取酵母质粒提取试剂盒酵母质粒大提试剂盒酵母质粒DNA大量提取酵母质粒DNA提取试剂盒酵母质粒DNA大提试剂盒高纯度酵母质粒大量提取试剂盒高纯度酵母质粒提取试剂盒高纯度酵母质粒大提试剂盒高纯度酵母质粒DNA大量提取高纯度酵母质粒DNA提取高纯度酵母质粒DNA大提Yeast Plasmid Maxi Kit(100-180mL)
首页 |  关于我们 |  联系我们 |  在线咨询 |  网站地图
北京百奥莱博科技有限公司 京ICP备14007103号-3